1.供試品溶液的制備：取蒲公英提取物1 g，加甲醇20 ml，加熱回流30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10 ml使溶解，濾過，濾液用醋酸乙酯振搖提取2次，10 ml/次，合并醋酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇1 ml使溶解，作為供試品溶液。
2.對照品溶液的制備：取咖啡酸對照品，加甲醇制成每毫升含0.5mg的溶液。另取綠原酸對照品，加甲醇制成每毫升含0.5 mg的溶液，作為對照品溶液。
3.薄層層析：吸取上述3種溶液各6 μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以醋酸丁酯－甲酸－水（7∶2.5∶2.5）的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢測。供試品色譜中，在與對照品相應(yīng)位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
▲含量測定：色譜柱Agilent Hypersil ODS柱（5μm，4.6mm×250mm）；流動相為甲醇－磷酸鹽緩沖液（pH4.0）：（23∶77），檢測波長323nm，柱溫25℃，流速為1.0ml/min。靈敏度：1.0AUFS；理論塔板數(shù)按咖啡酸峰計算應(yīng)不低于3000，咖啡酸峰與其他峰能達到基線分離，且出峰時間適宜，峰形較好。1.對照品溶液的制備：分別精密稱取在110℃干燥至恒重的綠原酸和咖啡酸對照品各2.5 mg，置50 ml容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，精密量取5ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得0.025 mg/ml的對照品溶液。2.供試品溶液的制備：取蒲公英提取物干粉0.5g，精密稱定，置100ml具塞錐形瓶中，精密加含5％甲酸的甲醇溶液50ml，密塞，搖勻，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率40kHz）30min，取出，放冷，再稱定重量，用含5％甲酸的甲醇溶液補足減失的重量，搖勻，離心，取上清液，用微孔濾膜（0.22 μm）濾過，濾液置棕色量瓶中，即得。
3.線性關(guān)系考察：分別精密稱取在110℃干燥至恒重的綠原酸和咖啡酸對照品各2.5mg，置50ml容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，再用甲醇逐級稀釋得0.05，0.025，0.0125，0.00625，0.003 125 mg/ml 5個不同濃度的對照品溶液，分別進樣10μl，測定其峰面積，然后分別以綠原酸和咖啡酸的濃度為橫坐標，5次測定峰面積的均值為縱坐標，繪制標準曲線，計算回歸方程為綠原酸：Y＝3×107X-24923,R2=0.9995；咖啡酸：Y＝5×107X+8 862.3, R2=0.999 9。實驗結(jié)果表明綠原酸和咖啡酸的濃度在0.003125～0.05 mg/ml范圍內(nèi)均與所測得的相應(yīng)峰面積呈良好的線性關(guān)系。